fluoróforos

Los fluoróforos son moléculas o nanomateriales que, al absorber luz de una longitud de onda específica, emiten luz de mayor longitud de onda. Se utilizan como etiquetas para detectar, visualizar o cuantificar moléculas y procesos biológicos y químicos.

Propiedades: cada fluoróforo tiene un espectro de absorción y emisión característico, un rendimiento cuántico y un coeficiente de extinción. La intensidad de la fluorescencia depende de la concentración, la iluminación y el entorno. Existen fluoróforos orgánicos (dyes como fluoresceína o rodamina), proteínas fluorescentes (GFP y derivados) y materiales inorgánicos (puntos cuánticos). Se pueden modificar para acoplarse covalentemente a biomoléculas mediante grupos funcionales, o expresarse como proteínas fluorescentes en células. Se deben considerar la fotostabilidad y el fotoblanqueo.

Usos: se emplean en microscopía de fluorescencia, citometría de flujo, hibridación in situ, inmunofluorescencia, secuenciación de ADN y ensayos de detección. La multiplexación se logra mediante combinaciones de fluoróforos con diferentes longitudes de onda y técnicas de separación de señal (unmixing) para evitar solapamientos. Las proteínas fluorescentes permiten estudiar dinámicas celulares en vivo y rastrear la localización de moléculas dentro de células.

Consideraciones técnicas: la superposición espectral limita el número de fluoróforos utilizables; la autofluorescencia de la muestra puede enmascarar la señal; muchos fluoróforos sufren fotoblanqueo bajo iluminación continua; algunos son sensibles al pH, a iones o al entorno. La selección debe basarse en brillo, fotostabilidad, compatibilidad con el experimento y con el equipo de detección; en muchas aplicaciones se emplean fluoróforos en la región del infrarrojo cercano para reducir problemas de autofluorescencia y mejorar la penetración de la señal.