autofluorescencia

La autofluorescencia es la emisión de luz por moléculas o estructuras que ya forman parte de un organismo o material cuando son excitadas por una fuente de luz externa, sin necesidad de fluoróforos añadidos.

En tejidos y células, los fluoróforos endógenos más comunes son NADH, FAD, lipofuscina, colágeno y elastina. Estos compuestos emiten fluorescencia al ser excitados por longitudes de onda determinadas: NADH se excita alrededor de 340–360 nm y emite alrededor de 460 nm; FAD se excita alrededor de 450 nm y emite alrededor de 520 nm; la lipofuscina presenta una emisión amplia en el rango visible; el colágeno y la elastina también generan emisiones visibles cuando se los ilumina con UV o azul.

La autofluorescencia puede complicar la detección de etiquetas fluorescentes introducidas para marcaje, ya que aporta un fondo no deseado a las imágenes. A la vez, se aprovecha de forma diagnóstica en áreas como la oftalmología (autofluorescencia de la retina) y en histología para estudiar metabolismo, envejecimiento celular o la composición de tejidos.

Para distinguir la autofluorescencia de señales específicas se utilizan técnicas como la captura espectral (con filtros y espectroscopía), el unmixing espectral y métodos basados en el tiempo de vida de la fluorescencia (time-resolved). También se puede reducir la contribución de la autofluorescencia empleando longitudes de onda cercanas al infrarrojo, ajustes de iluminación y controles adecuados.

Sus limitaciones incluyen variabilidad entre tejidos y condiciones, solapamiento de espectros y dependencias del estado metabólico. La autofluorescencia puede limitar la cuantificación de biomarcadores fluorescentes, pero también ofrece una fuente de información adicional sin necesidad de marcadores.

En resumen, la autofluorescencia es una propiedad óptica natural que puede representar tanto un desafío como una herramienta valiosa en biomedicina y en el estudio de materiales, dependiendo de su manejo experimental.