fluoróforo

Un fluoróforo es una sustancia capaz de absorber luz de una longitud de onda y emitirla a una longitud mayor, un fenómeno conocido como fluorescencia. Los fluoróforos pueden ser intrínsecos a una molécula (cromóforos naturales) o moléculas externas unidas a biomoléculas para servir como etiquetas fluorescentes.

Cuando un fluoróforo es excitado, sus electrones pasan a un estado electrónico excitado y, al volver a un estado de menor energía, emiten fotones. La eficiencia de emisión, o rendimiento cuántico, y el coeficiente de extinción determinan la intensidad visible de la señal. Existe además un desplazamiento de Stokes entre la excitación y la emisión.

Las propiedades clave para la biología incluyen las longitudes de excitación y emisión compatibles con los equipos de microscopía, la fotostabilidad frente a la disminución de señal con la iluminación continua y la intensidad de brillo. Los fluoróforos pueden ser etiquetas químicas o proteínas fluorescentes como la GFP y sus derivados; también existen fluoróforos sintéticos como fluoresceína, rodamina, y colorantes Alexa o cyaninas, así como nanopartículas cuánticas.

En aplicaciones, se emplean para detectar, localizar y cuantificar moléculas en células, tejidos y fluidos, mediante microscopía de fluorescencia, citometría de flujo y ensayos basados en fluorescencia. La selección del fluoróforo depende de la compatibilidad espectral, la estabilidad, la biocompatibilidad y la posibilidad de etiquetar sin perturbar la molécula de interés. Entre las consideraciones están el solapamiento espectral y el fotoblanqueo.