Flowzytometrie

Flowzytometrie, auch Flusszytometrie oder Flow Cytometry genannt, ist eine Labortechnik zur Analyse von physikalischen und chemischen Eigenschaften einzelner Zellen oder Partikel in Suspension. Durch Passieren der Zellen in Einzellage durch einen oder mehrere Laserstrahlen werden Lichtstreuung und Fluoreszenz gemessen. Die Vorwärtsstreuung (FSC) korreliert grob mit Zellgröße, die Seitenstreuung (SSC) mit innerer Struktur. Marker-spezifische Fluorochrome, die an Antikörper oder Farbstoffe gebunden sind, liefern zusätzliche Fluoreszenzsignale, die multiparametrisch gemessen werden; häufige Marker beziehen sich auf Oberflächenproteine, intrazelluläre Proteine oder Nukleinsäure.

Die Ausrüstung umfasst einen Fließkanal mit hydrodynamischer Fokussierung, Laserquellen unterschiedlicher Wellenlänge, Detektoren (Photomultiplier) für FSC, SSC und mehrere Fluoreszenzkanäle sowie eine Software zur Datenauswertung. Pro Analyseschritt entstehen Ereignisse pro Sekunde; die erhobenen Daten werden oft durch Gates in Zellpopulationen unterteilt. Die Daten müssen durch Kompensation von überlappenden Fluorochromemissionen korrigiert werden.

Anwendungen reichen von Immunphänotypisierung und Zellanalyse in der Hämatologie und Onkologie über Sortierverfahren (FACS) bis zu Zellzyklus-, Apoptose- und Signalanalyse. Typische Proben sind Blut, Knochenmark, Gewebeaufschlämmungen und Zellkulturen. Qualitätssicherung erfolgt über Kalibrierungs- und Qualitätsbeads, regelmäßige Wartung sowie standardisierte Protokolle.

Vorteile der Flowzytometrie sind die hohe Durchsatzrate, die gleichzeitige Erfassung multipler Parameter pro Zelle und die Fähigkeit, seltene Zellpopulationen zu identifizieren. Einschränkungen umfassen die Notwendigkeit gut disaggregierter Einzelzellen, potenzielle Artefakte durch Fluorochrom-Überlappung und die Komplexität der Auswertung.