zymografía

La zymografía es una técnica de electroforesis en gel que permite detectar la actividad enzimática de proteínas hidrolíticas, principalmente proteasas. En este método, las enzimas se separan por electroforesis en un gel que contiene un sustrato incorporado; la digestión del sustrato en el gel se visualiza como zonas claras sobre un fondo teñido.

Principio y procedimiento: la separación se realiza en condiciones no desnaturalizantes para mantener la actividad enzimática (a veces con una pequeña cantidad de SDS que se elimina posteriormente). Tras la corrida, el gel se renatura para eliminar el SDS y se incuba en un tampón de desarrollo con el sustrato disponible en el gel. Si la enzima es activa, digiere el sustrato en la región del gel correspondiente, dejando una zona libre que se detecta tras teñido (normalmente con azul de Coomassie). La ubicación de la banda da una estimación de peso molecular aproximado por comparación con marcadores.

Sustratos y variantes: el sustrato más común es la gelatina, utilizado para detectar gelatinases como MMP-2 y MMP-9. También se emplean caseína, fibrina u otros sustratos para diferentes enzimas. Existen variantes como la zymografía inversa para detectar inhibidores (p. ej., TIMPs) o zymografías específicas por clase de enzima hidrolítica, incluidos esterases o glicohidrolasas, según el sustrato empleado.

Aplicaciones y limitaciones: la zymografía se aplica en investigaciones sobre remodelación de la matriz extracelular, cáncer, inflamación y secreciones celulares, a partir de muestras como cultivos celulares, fluidos biológicos o tejidos. Es una técnica semicuantitativa y dependiente del sustrato; ofrece información sobre presencia y tamaño aparente de la actividad, pero no identifica con certeza a la enzima individual y requiere controles adecuados.