enzymhistochemie

Enzymhistochemie, auch Enzymhistochimie, ist ein bildgebendes Verfahren, das die räumliche Verteilung enzymatischer Aktivität in Geweben oder Zellen sichtbar macht. Dabei wird ein substrat spezifisch durch das Enzym umgesetzt, wodurch ein sichtbar bleibendes Signal entsteht, häufig in Form eines farbigen Prezipitates oder einer Fluoreszenz. Ziel ist es, die lokale Aktivität eines bestimmten Enzyms direkt im histologischen Kontext zu beurteilen.

Prinzip und Substrate: Die Methode beruht darauf, dass das Enzym ein chemisches Reaktionsprodukt erzeugt, das durch Kontrastmittel sichtbar gemacht wird. Gängige chromogene Reaktionen verwenden zum Beispiel alkalische Phosphatase oder Peroxidasen mit passenden Substraten wie BCIP/NBT bzw. DAB/H2O2. Es gibt auch fluorogene Varianten. Die Technik kann für verschiedene Enzymklassen eingesetzt werden, darunter Phosphatasen, Hydrolasen oder Reduktasen. Die Reaktionsparameter wie pH, Temperatur, Substratkonzentration und Inkubationszeit müssen optimiert werden.

Proben, Fixierung und Kontrollen: Enzymhistochemische Nachweise erfordern Gewebeproben, bei denen die Enzymaktivität weitgehend erhalten bleibt. Frischgefrorenes Material oder leichte Fixierung wird bevorzugt; paraffinierte Schnitte benötigen oft spezielle Protokolle. Kontrollen umfassen negative Kontrollen (ohne Substrat oder hitzeinaktiviertes Enzym) und, falls möglich, Vergleich mit nachweislich aktivem Gewebe.

Anwendungen: Die Methode findet breite Anwendung in Forschung und Diagnostik, etwa zur kartografischen Darstellung enzymatischer Aktivität im Gehirn, Leber oder Tumorgewebe, zur Charakterisierung von Stoffwechselwegen, zur Diagnostik lysosomaler Erkrankungen oder zur Evaluation von Gewebeproben in der Pathologie.

Limitierungen: Enzymaktivität ist empfindlich gegenüber Gewebeverarbeitung; Diffusion des Reaktionsprodukts kann Signale verzerren; mischerregelige Kontrollen und vorsichtige Interpretation sind erforderlich.