HPLCfluorometria

HPLCfluorometria es una técnica que combina la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con la detección de fluorescencia. Los analitos que pueden emitir fluorescencia son excitados y la emisión se detecta, permitiendo la cuantificación por la intensidad de fluorescencia.

La instrumentación típica consiste en un sistema HPLC acoplado a un detector de fluorescencia. El detector utiliza una fuente de excitación (por ejemplo, lámpara de xenón o LED) y una celda de flujo con filtros o un monocromador para seleccionar la emisión. En algunos métodos se emplea derivatización post-columna para convertir analitos no fluorescentes en fluorescentes. La detección puede realizarse en línea con la columna y se acompaña de software para calibración e integración.

La fluorometría ofrece alta sensibilidad y selectividad; los límites de detección pueden ir de ng/L a pg/mL según el analito. Las limitaciones incluyen que no todos los compuestos son fluorescentes y pueden existir interferencias por autofluorescencia de matrices.

Aplicaciones comunes incluyen análisis de fármacos, pesticidas, vitaminas, aminoácidos, nucleótidos, PAHs y otros compuestos fluorescentes en alimentos, aguas y muestras biológicas. En comparación con LC-UV, la HPLCfluorometria suele presentar mayor sensibilidad, aunque es menos universal que LC-MS y requiere optimización de condiciones de iluminación y, a veces, derivatización.