Antikörpermarkierung

Antikörpermarkierung bezeichnet das Anbringen eines erkennbaren Labels an einen Antikörper, um dessen Bindungsergebnis sichtbar, messbar oder nachweisbar zu machen. Ziel ist es, Antikörper-basiertes Nachweisen, Lokalisieren oder Quantifizieren von Antigenen zu ermöglichen, sowohl in zellulären Systemen als auch in Gewebeproben oder Flüssigkeiten.

Labels umfassen verschiedene Typen. Zu den häufigen gehören fluoreszierende Farbstoffe für als Immunfluoreszenz bezeichnete Verfahren, Enzyme wie Horseradish Peroxidase oder alkalische Phosphatase für farb- oder lumineszenzbasierte Nachweise, und Radiolabels für bildgebende Anwendungen. Weitere Optionen sind Biotin-Streptavidin-Systeme, Quantenpunkte oder andere Nanopartikel. Jedes Label liefert spezifische Signale und erfordert entsprechende Detektionsmethoden.

Anwendungen finden sich in der Immunhistochemie und Immunocyto­chemie, Immunofluoreszenz, Western Blot, ELISA, Durchflusszytometrie und in vivo-Bildgebung. Die Wahl des Labels richtet sich nach der Fragestellung, Probenart und Detektionsmethode sowie nach Empfindlichkeit, Auflösung und Rauschunterdrückung.

Methodik. Es gibt direkte Markierung, bei der das Label direkt an den Antikörper gebunden wird, und indirekte Markierung, bei der ein zweiter beschrifteter Antikörper oder ein Beschreib-System verwendet wird. Typische Kopplungen erfolgen über Aminogruppen (NHS-Ester), Sulfhydryle, oder spezialisierte Chemien wie Click-Reaktionen. Der Grad der Markierung (DOL) muss optimiert werden, da zu viele Labels die Antigenbindung beeinträchtigen können.

Qualitätssicherung umfasst Regularien zur Spezifität, Stabilität, Lagerung und mögliche Signal-Rausch-Verhältnisse. Radionuklid-Labels erfordern besondere Sicherheitsmaßnahmen.