Immunfluoreszenz

Die Immunfluoreszenz ist eine bildgebende Methode, mit der spezifische Antigene mithilfe von Antikörpern sichtbar gemacht werden, die mit Fluorophoren markiert sind. Das Prinzip beruht darauf, dass Fluorophore Licht einer bestimmten Anregungswelle absorbieren und Licht einer längereren Emissionswelle wieder abgeben, wodurch der Ort des Antigens unter einem Fluoreszenzmikroskop sichtbar wird. Dabei verbinden sich Antikörper spezifisch mit dem Zielantigen, so dass dessen Verteilung in Zellen oder Geweben abgebildet werden kann. Strenge Kontrollen minimieren unspezifische Bindungen.

Es gibt zwei Hauptformen der Immunfluoreszenz: direkte Immunfluoreszenz, bei der der Antikörper direkt mit einem Fluorophor gekennzeichnet ist, und indirekte Immunfluoreszenz, bei der ein unmarkierter Primärantikörper das Antigen bindet und ein sekundärer, fluoreszenzmarkierter Antikörper gegen den Primärantikörper die Signale liefert. Die indirekte Methode erhöht oft die Empfindlichkeit und ermöglicht die Verwendung verschiedener Fluorophore.

Typische Proben sind Gewebeschnitte oder Zellen auf Objektträgern. Die Proben werden fixiert und oft durchlässig gemacht, mit Blockierung von Nicht-Spezifität behandelt, danach mit den Antikörpern inkubiert, gründlich gewaschen und schließlich mit einem antifade Medium abgedeckt, um Fluoreszenzverlust zu minimieren. Die Auswertung erfolgt mit einem Fluoreszenzmikroskop unter geeigneten Filtersets.

Anwendungen liegen in der klinischen Diagnostik, der Pathologie und der Grundlagenforschung: z. B. Lokalisierung von Proteinen in Gewebeproben, Nachweis von Autoantikörpern, sowie der Erregernachweis in Infektionskrankheiten durch spezifische Antigene.

Vorteile der Immunfluoreszenz umfassen direkte visuelle Lokalisierung und relative Empfindlichkeit; Nachteile sind potenzielle Kreuzreaktivität, Autofluoreszenz, Photobleaching und der Bedarf an geeigneten Kontrollen.