oligonucleotídeos

Oligonucleotídeos são moléculas curtas de ácido nucleico formadas por uma sequência de nucleotídeos unidos por ligações fosfodiéster. Podem ser de DNA ou RNA e são tipicamente sintetizados quimicamente. Em geral, possuem entre 15 e 50 nucleotídeos, embora comprimentos diferentes sejam empregados conforme o objetivo. Servem como unidades de construção em biologia molecular e como ferramentas para detecção, manipulação e regulação da expressão gênica.

A síntese de oligonucleotídeos ocorre via química de fase sólida, com proteção de grupos que permite a construção passo a passo da cadeia. Após a síntese, os oligonucleotídeos costumam ser purificados por métodos como HPLC. Muitas vezes recebem modificações químicas para aumentar a estabilidade frente a nucleases, a afinidade de hibridização ou facilitar a entrega celular. Exemplos incluem backbones alternativos como fosforotioatos, modificações na ribose como 2'-O-metil ou 2'-fluoro, e nucleotídeos de LNA; também podem ser conjugados a lipídios ou a polietilenoglicóis para melhorar a biodisponibilidade.

Principais aplicações envolvem primers de PCR, sondas para hibridização e detecção (em qPCR, Sanger e sequenciamento), e sondas para microarranjos e FISH. Em biomedicina, oligonucleotídeos antisense e oligonucleotídeos de silenciamento (siRNA) são usados para modular a expressão gênica. O CRISPR utiliza gRNA, um oligonucleotídeo de RNA que orienta a nuclease. Em diagnóstico, os oligonucleotídeos são amplamente empregados em ensaios de detecção.

Considerações incluem especificidade de sequência, estabilidade, entrega e potencial de efeitos off-target. Questões regulatórias e de biossegurança acompanham o uso terapêutico, enquanto a síntese e o controle de qualidade são centrais para pesquisa e aplicação clínica.