fluorimetrisch

Fluorimetrie, auch fluorimetrische Messung, ist eine analytische Technik, die die Intensität des Fluoreszenzsignals nutzt, um die Konzentration eines Fluorophors oder fluoreszierenden Analyten zu bestimmen. Nach Anregung der Probe mit Licht einer kurzen Wellenlänge emittiert das Molekül Licht bei längeren Emissionswellenlängen. Unter geeigneten Bedingungen ist die Emissionsintensität proportional zur Konzentration des Fluorophors, was eine quantitative Bestimmung ermöglicht.

Instrumentell wird dazu ein Fluorometer verwendet, das zwei Monochromatoren besitzt: einen für die Anregungswelle und einen für die Emissionswelle, sowie einen lichtdichten Detektor wie Photomultiplier oder Photodiode. Typische Lichtquellen sind Xenon- oder Halogenlampen, LEDs oder Laser. Es gibt verschiedene Messmodi, darunter die steady-state-Fluoreszenz und die zeitaufgelöste Fluoreszenz (Lebensdauermessung), die besonders hilfreich ist, um Hintergrundsignale zu reduzieren.

Fluorimetrische Analysen verwenden entweder intrinsische Fluoreszenz eines Moleküls (z. B. Tryptophan) oder extrinsische Fluorophore, die durch chemische Reaktionen oder Bindung an Nukleinsäuren, Proteine oder Metallionen eingeführt werden. Anwendungen finden sich in der Umweltanalytik, Chemie, Biochemie und klinischen Diagnostik, etwa bei Enzymassays, dem Nachweis von Spurenelementen nach Komplexbildung oder der quantitativen Bestimmung von Biomolekülen mittels fluoreszierender Labels.

Zu den Vorteilen gehören hohe Empfindlichkeit, geringe Hintergrundsignale im Vergleich zu Absorptionsmethoden und eine breite Dynamik. Einschränkungen umfassen Photobleaching, Quenching, innere Filtereffekte, Interferenzen durch körpereigene Fluoreszenz sowie Kosten und Bedarf an geeigneten Probenvorbereitungen.

Fluorimetrie ist damit eine zentrale Technik der quantitativen Analytik, die schnelle, sensitive Messungen in Flüssigproben ermöglicht.