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Einzelzelltranskriptom

Das Einzelzelltranskriptom bezeichnet das vollständige Set der transkribierten RNA-Moleküle in einer einzelnen Zelle zu einem bestimmten Zeitpunkt. Im Gegensatz zur Bulk-RNA-Sequenzierung, bei der Signale aus vielen Zellen gemischt werden, ermöglicht das Einzelzelltranskriptom die Erfassung zellulärer Heterogenität, identifiziert verschiedene Zelltypen und Zellzustände sowie dynamische Prozesse wie Entwicklungs- oder Reifungsprozesse.

Die gängigen Methoden der Einzelzell-RNA-Sequenzierung (scRNA-seq) verwenden mikrofluidische Droplet-Plattformen (z. B. Drop-seq, 10x Genomics) oder well-based

Typischer Workflow: Einzelzellen isolieren, Zelllyse, Umkehrtranskription, Bibliotheksvorbereitung, Sequenzierung; Daten: Rohcounts, Normalisierung, Qualitätskontrollen, Dimensionsreduktion, Clustering, Identifikation

Anwendungen reichen von der Entwicklungsbiologie über Neurowissenschaften, Krebs- und Immunforschung bis zur Untersuchung von Gewebearchitektur und

Herausforderungen umfassen technisches Rauschen, Dropout-Effekte (nicht erkannte Gene in einzelnen Zellen), Batch-Effekte, Datenkomplexität und hohen Rechenaufwand.

Plate-Ansätze
(z.
B.
Smart-seq2).
Die
Abtastung
liefert
in
der
Regel
RNA-Transkripte
pro
Zelle;
häufig
werden
UMI
(unique
molecular
identifiers)
eingesetzt,
um
PCR-Duplikate
zu
korrigieren.
von
Marker-Genen,
Differentialexpression;
zusätzlich
Trajektorien-
oder
Pseudotime-Analysen
zur
Rekonstruktion
von
Entwicklungsverläufen.
Zellinteraktionen.
Durch
die
Auflösung
auf
Zellebene
lassen
sich
seltene
Zelltypen
und
Zellzustände
entdecken.
Die
Interpretation
erfordert
robuste
Normalisierung,
Integrations-
und
Validierungsstrategien.