espectrofotómetros

Un espectrofotómetro es un instrumento analítico que mide la intensidad de la luz en función de la longitud de onda para caracterizar y cuantificar sustancias en una muestra. Funciona al hacer pasar un haz de luz a través de la muestra y medir la luz que llega al detector, ya sea como intensidad transmitida o como absorbancia. En la mayoría de los espectrofotómetros de UV-Visible se utiliza la Ley de Beer-Lambert, que relaciona la absorbancia con la concentración de analito: A = εlc, donde A es la absorbancia, ε es la coeficiente de absorción molar, l es la longitud de camino de la cuvetilla y c es la concentración.

Componentes clave y funcionamiento: una fuente de luz (por ejemplo, tungsteno para el rango visible y deuterio para el UV), un monocromador (prisma o retículo para seleccionar la longitud de onda deseada), la muestra en una cuvetta y un detector (fotodiodo, fotomultiplicador). El instrumento puede operar en modo de haz único o de haz doble; el segundo tipo compara directamente la muestra con un blanco o referencia para compensar variaciones de la lámpara y de la geometría óptica.

Rangos y cuvetas: los espectrofotómetros UV-Vis suelen cubrir ~190–900 nm. Las cuvetas deben ser de cuarzo para UV y de material adecuado para el visible. Las salidas de lectura permiten expresar resultados como absorbancia (A, sin unidades) o transmitancia (T, en %).

Aplicaciones: cuantificación de sustancias en química, bioquímica y ambiental; determinación de proteínas y ácidos nucleicos, análisis de contaminantes, control de calidad en alimentos y farmacéuticos. Requiere calibración, uso de blanco y, en muchos casos, corrección de deriva y linealidad óptica.