enzimmarkierung

Enzymmarkierung ist eine Labor- oder Diagnosetechnik, bei der Enzyme an biomolekulare Marker wie Antikörper oder Sonden gekoppelt werden. Ziel ist es, das Zielmolekül durch eine enzymatische Reaktion sichtbar zu machen. Die Methode wird vor allem in der Immunhistochemie und Molekularbiologie eingesetzt, um die Lokalisierung von Proteinen, Enzymen oder Nukleinsäuren zu bestimmen.

Der Grundsatz: Das Enzym dient als Signalgeber und erzeugt durch Substratreaktion einen sichtbaren Nachweis. Häufig verwendete Enzyme sind Horseradish-Peroxidase (HRP) und Alkalische Phosphatase (AP). Chromogene Substrate liefern Farbstoffe (z. B. DAB für Braun; BCIP/NBT für Blau/Violett). Chemiluminescente Systeme nutzen Substrate wie Luminol, die Licht erzeugen.

Anwendungen erfolgen überwiegend in der Immunhistochemie, wo Antikörper mit dem Enzym verknüpft sind (direkte oder indirekte Nachweise). Nach Bindung an das Zielprotein wird das Substrat gegeben, wodurch der Bereich sichtbar wird. Gewebeproben, Zellen oder Schnitte kommen zum Einsatz. Es existieren chromogene, chemiluminescente und fluorogene Enzymnachweise, je nach Anwendung.

Vorteile sind hohe Empfindlichkeit, robuste, permanente Marker und klare räumliche Lokalisierung. Nachteile umfassen Hintergrund durch endogene Enzyme, notwendige Blockierung, Einfluss von Fixierung und Probenvorbereitung sowie eingeschränkte Quantifizierbarkeit. Eine sorgfältige Optimierung und geeignete Kontrollen sind erforderlich.