Spektrofotometria

Spektrofotometría, también llamada espectrofotometría, es una técnica analítica que mide la intensidad de la luz que una muestra absorbe o transmite a una longitud de onda específica. Al atravesar una solución, parte de la luz se atenúa según la concentración del analito. La relación entre absorbancia (A) y concentración (c) se describe, en condiciones simples, por la ley de Beer-Lambert: A = ε l c, donde ε es el coeficiente de absorción molar, l es la longitud del trayecto de la cubeta y c la concentración.

Un espectrofotómetro se compone de una fuente de luz, un sistema de selección de longitud de onda (monocromador), la cubeta de la muestra y un detector. La lectura se expresa como absorbancia o transmisión. Se usan distintas regiones del espectro: UV-visible para muchas moléculas orgánicas y biomoléculas, e infrarrojo para vibraciones moleculares. En cuantificación, se preparan estándares y se construye una curva de calibración.

Aplicaciones y consideraciones: la espectrofotometría se utiliza para cuantificar concentraciones de analitos en química analítica, bioquímica y medicina (ensayos enzimáticos, determinación de ácidos nucleicos y proteínas), control de calidad y análisis ambiental. Limitaciones: la relación A = ε l c es lineal solo en rangos moderados de concentración, y pueden ocurrir interferencias por otros absorbentes, turbidez o desalineación óptica. Es necesario aplicar un blanco, considerar el efecto del solvente y garantizar que la muestra sea homogénea y estable. En condiciones adecuadas, la técnica es rápida, sensible y relativamente simple.