espectrofotometría

La espectrofotometría es una técnica analítica que cuantifica la concentración de una sustancia midiendo la cantidad de luz que la muestra absorbe o transmite a una longitud de onda específica. Se basa en la ley de Beer-Lambert, que relaciona la absorbancia A con la concentración c mediante A = ε l c, donde ε es el coeficiente de absorción molar y l es la trayectoria óptica. En la práctica, se mide la absorbancia a una longitud de onda adecuada para el cromóforo de la muestra.

El equipo básico incluye una fuente de luz, un sistema de selección de longitud de onda (monocromador o filtro), una cubeta con la muestra y un detector que registra la intensidad transmitida o la absorbancia. Un lector convierte la señal en valores cuantitativos que se interpretan mediante curvas de calibración.

En cuantificación, se preparan soluciones de concentración conocida para generar una curva de calibración de absorbancia frente a concentración. La muestra se mide a la misma longitud de onda y su concentración se obtiene a partir de la curva o de la ley Beer-Lambert cuando corresponde. Es común en control de calidad, química clínica y análisis ambiental.

La espectrofotometría abarca modalidades como UV-Visible, que analiza aproximadamente 200–800 nm, y variantes en infrarrojos y otras regiones. La UV-Vis es la más empleada para sustancias con cromóforos; existen además métodos de fluorescencia o emisión para diferentes tipos de muestras.

Ventajas: técnica simple, rápida y relativamente económica. Limitaciones: interferencias de la matriz, desviaciones de Beer-Lambert a altas concentraciones, necesidad de un cromóforo y posibles efectos de turbidez.

Historia: la espectrofotometría se desarrolló a partir de los trabajos de Lambert y Beer en el siglo XIX. Hoy es una técnica de análisis rutinario en laboratorios de investigación y control de calidad.