Chromatografi

Chromatografi adalah teknik pemisahan yang memanfaatkan perbedaan interaksi antara komponen campuran dengan fase diam dan fase gerak. Dalam prosesnya, campuran dilarutkan dalam fase gerak yang mengalir melalui kolom atau bidang yang berfungsi sebagai fase diam. Komponen dengan afinitas lebih besar terhadap fase diam akan tertahan lebih lama, sedangkan komponen yang lebih suka fase gerak akan bergerak lebih cepat. Hasilnya, komponen terpisah ketika perbedaan retensi cukup untuk memisahkannya.

Jenis utama chromatografi meliputi kromatografi gas (GC) dan kromatografi cair (LC). GC menggunakan fase gerak gas inert dan fase diam berupa kolom berpori; analit yang cukup volatil dipisahkan melalui variasi interaksi dengan suhu kolom. LC menggunakan fase gerak cair melalui kolom berisi sorben seperti silika atau polimer; mode umum meliputi fase terbalik (RP-HPLC) dan fase normal, yang memengaruhi pola pemisahan. Detektor yang umum dipakai meliputi UV–Vis, refraktometri, atau massa.

Chromatografi planar juga lazim, meliputi kromatografi kertas dan TLC (kromatografi lapisan tipis). Pada TLC, campuran dioleskan pada ujung lapisan tipis yang melekat pada lempeng, lalu fase gerak bergerak menaik karena kapilaritas, sehingga komponen terpisah berdasarkan afinitas terhadap fase diam.

Beberapa teknik pemurnian menggunakan kromatografi, seperti ion-exchange, size-exclusion, dan affinity chromatography, untuk memurnikan protein, enzim, atau biomolekul lainnya. Sistem kolom dapat dihubungkan dengan detektor untuk analisis kuantitatif, misalnya UV–Vis, refraktometri, atau mass spectrometry. Parameter kinerja utama meliputi efisiensi kolom, faktor retensi, resolusi, dan kapasitas.

Sejarah singkat: Chromatografi dikembangkan pada awal abad ke-20 oleh Mikhail Tsvet untuk memisahkan pigmen tumbuhan. Sejak itu, teknik ini berkembang luas dan menjadi alat penting dalam kimia analitik, biokimia, farmasi, serta analisis lingkungan, dengan terus dikembangkan melalui inovasi pada fase diam, fase gerak, dan detektor.