Flowsytometriassa

Flowsytometria on laboratoriotekniikka, jossa yksittäisiä soluja tai muita pienikokoisia partikkeleita analysoidaan virtaavan nesteen läpi. Näytteet suspensoidaan ja kuljetetaan hydrodynaamisesti kohti lasersäteilyä tai muuta valonlähdettä, jolloin jokaiselta kappaleelta mitataan sekä sirontaa että fluoresenssia.

Periaate: Forward scatter FSC mittaa kappaleen kokoa, side scatter SSC sen sisäistä rakennetta ja monimutkaisuutta. Kun solut on merkitty fluoresenssilla, pystytään samanaikaisesti mittaamaan useita fluoroforeja. Laitteisto kerää signaalit nopeasti, ja tulokset esitetään yleensä dot-plotteina sekä histogrammeina. Data analysoidaan gating-tekniikoilla, joilla voidaan erottaa erilaiset solupopulaatiot.

Laitteistoon kuuluvat: virtaavaaä, jossa näyte kulkee; hydrodynaaminen fokusoija; lasersäteet tai muut valonlähteet; detektorit (esim. fotomultiplierit); sekä signaalin käsittely- ja analysointiohjelmisto. Fluoresenssin avulla voidaan tunnistaa ja eristää useita soluryhmiä kerralla, ja tarvittaessa lajitella valitettuja solupopulaatioita (FACS, fluoresenssahdistettu solujen lajittelu).

Näytteiden valmistelu: solut pitää saada yksittäisiksi ja mahdollisesti aggregoituneet poistettua. Näytteeseen lisätään fluoroforeilla merkittyjä vastaa-aineita sekä tarvittaessa elinkelpoisuutta tai solun tilaa ilmentäviä värjäyksiä. Kontrollit kuten isotype- ja FMO-kontrollit sekä spektrin kompensaatio varmistavat tulosten luotettavuuden.

Käyttökohteet: immunophenotyyppien määrittäminen, immuunijärjestelmän solujen luokittelu, erilaisten hematologisten sairauksien diagnostiikka sekä solujen tilan, proliferations ja apoptoosin tutkiminen useiden merkkien samanaikaisella mittauksella.