spectrofotometrie

La spectrophotométrie est une technique analytique qui mesure l’intensité de la lumière en fonction de la longueur d’onde afin de déterminer la concentration d’un analyte dans un échantillon ou d’étudier des propriétés optiques. Elle repose sur le fait que certaines substances absorbe ou transmittent différemment la lumière selon la longueur d’onde.

Le principe repose sur la relation entre l’absorbance, la transmittance et la concentration décrite par la loi de Beer-Lambert. Lorsqu’un faisceau lumineux traverse une solution, une partie est absorbée et une partie est transmise. L’absorbance A est liée à la concentration c et à la longueur du trajet l par A = ε·l·c, où ε est l’absorptivité molaire. La transmittance T = I/I0 et A = -log10(T). En pratique, on mesure l’intensité lumineuse transmise à une longueur d’onde choisie et on en déduit la concentration à partir d’un étalonnage.

Les instruments de spectrophotométrie typiques comprennent une source lumineuse, un monochromateur (prisme ou réseau) pour sélectionner la longueur d’onde, une cellule ou cuvette contenant l’échantillon et un détecteur (photodiode, photomultiplicateur). Le domaine ultraviolet-visible (UV-Vis) est le plus répandu, mais des configurations existent pour l’infrarouge ou d’autres gammes.

La spectrophotométrie est utilisée pour des analyses quantitatives, la détermination de la pureté, le suivi de réactions chimiques et immunologiques, la quantification d’éléments ou de biomolécules, ainsi que dans les industries pharmaceutique, alimentaire et environnementale. Des contrôles et des blancs sont essentiels pour corriger les interférences et obtenir des résultats fiables. Des limitations incluent les échantillons peu transparents ou fortement dispersifs et les interférences spectrales dues à d’autres espèces absorbeuses.