fluorescencemicroscopie

La fluorescencemicroscopie, aussi appelée microscopie à fluorescence, est une technique optique qui permet d’obtenir des images en utilisant des fluorophores qui émettent de la lumière lorsqu’ils sont excités par une source lumineuse.

Principe et instrumentation: une lumière d’excitation est dirigée vers l’échantillon. Les fluorophores absorbent cette énergie et émettent des photons à une longueur d’onde plus longue. Des filtres d’excitation et d’émission et un miroir dichroïque séparent les faisceaux, et l’image est enregistrée par une caméra ou un détecteur.

Marquage et étiquetage: les fluorophores peuvent être des colorants chimiques, des protéines fluorescentes comme la GFP, ou des fluorochromes couplés à des anticorps (immunofluorescence). Ces étiquetages permettent de localiser des protéines, organites ou structures cellulaires.

Variantes et performances: les configurations les plus courantes sont la microscopie à fluorescence épifluorescente et la microscopie confocale, qui offrent une meilleure résolution et optique en balayage point par point. Des approches multiphoton et des méthodes super-résolution (STED, PALM, STORM) améliorent la résolution au-delà du plafond de diffraction.

Applications: la fluorescence est utilisée en biologie cellulaire et tissulaire pour observer la localisation et les dynamiques de protéines, les interactions moléculaires et les processus vivants, ainsi qu’en diagnostic médical et en imagerie histologique.

Limites: la photoblanchiment et la phototoxicité peuvent endommager des échantillons; une co-localisation spectrale peut compliquer l’interprétation; les artefacts d’étiquetage et de préparation peuvent influencer les résultats.

Histoire: les techniques fluorescentes apparaissent au XXe siècle, avec l’immunofluorescence dans les années 1940 et le développement du microscope à confocale et des méthodes super-résolution à la fin du XXe et au début du XXIe siècle.