elektroforet

Elektroforet er en laboratorieteknikk som brukes til å separere molekyler i en løsning ved hjelp av et elektrisk felt. Molekyler med netto ladning migrerer gjennom en gel eller en væskematrise og skilles etter størrelse, ladning og konformasjon. Metoden er viktig i biokjemi, molekylærbiologi og klinisk diagnostikk.

Grunnprinsippet er at ladede molekyler vandrer mot elektroden med motsatt polaritet. Migrasjonshastigheten påvirkes av molekylstørrelse, ladning og form, samt egenskaper ved matrisen, bufferen og temperaturen. Gel-elektroforese bruker et porøst matriks: agarose for større fragmenter og polyakrylamid for høy oppløsning og små fragmenter. Denaturerende teknikker som SDS-PAGE gir proteiner en konstant forhold mellom ladning og størrelse, slik at separasjonen i hovedsak skjer etter størrelse.

Viktige varianter inkluderer agarosegel-elektroforese for DNA og RNA, SDS-PAGE for proteiner, kapillær elektroforese som gir rask analyse og automatisering, samt isoelektrisk fokusering som separerer etter isoelectric punkt og brukes i proteomikk og diagnostikk.

Bufferløsninger som TAE og TBE fungerer som elektrolytter og påvirker oppløsning og migrasjon. Elektroforese brukes i genotyping, rettsmedisin, diagnostikk og forskning på DNA, RNA og proteiner. Begrensninger inkluderer avhengighet av riktig prøver-prep og bruk av farlige kjemikalier ved akrylamid-basert gel.

Historisk ble elektroforet utviklet tidlig på 1900-tallet og videreutviklet av forskere som Arne Tiselius og kolleger.