affiniteettipurifiointi

Affiniteettipurifiointi, tunnetaan myös nimellä affiniteettikromatografia, on biokemiallinen eristysmenetelmä, jolla erotetaan ja puhdistetaan tiettyä molekyyliä tai molekyyliryhmää seoksesta. Menetelmä perustuu spesifisiin vuorovaikutuksiin, kuten antigeeni-vasta-aine-, entsyymi-substraatti- tai ligandi-reseptori-vuorovaikutuksiin, jotka ovat tunnettuja ja kohdennettuja.

Prosessi alkaa kiinteällä faasilla, joka on tyypillisesti kromatografiapatsas, johon on immobilisoitu sitova ligandi. Tämä ligandi on valittu niin, että se sitoutuu spesifisesti haluttuun kohdemolekyyliin. Kun seosta, joka sisältää kohdemolekyylin ja muita aineita, johdetaan patsaan läpi, kohdemolekyyli sitoutuu ligandiin, kun taas muut aineet eivät sitoudu tai sitoutuvat heikosti ja huuhtoutuvat pois.

Kun kohdemolekyyli on sitoutunut, sen irrottamiseksi käytetään eluenttia. Eluentti on liuotin tai puskuriliuos, joka muuttaa sitoutumisolosuhteita, kuten pH:ta, ionivahvuutta tai lisää kilpailevaa molekyyliä, jotta kohdemolekyyli vapautuu ligandista. Vapautunut, puhdas kohdemolekyyli kerätään talteen patsaan jälkeen.

Affiniteettipurifiointi on erittäin spesifinen ja tehokas menetelmä, ja sitä käytetään laajalti proteiinien, vasta-aineiden, nukleiinihappojen ja muiden biomolekyylien eristämiseen ja puhdistamiseen muun muassa bioteknologiassa, lääketutkimuksessa ja diagnostisissa sovelluksissa. Sen etuja ovat korkea selektiivisyys ja kyky puhdistaa molekyylejä suhteellisen miedoin olosuhtein.