Peroxidbaserad

Peroxidbaserad avser system eller metoder som bygger på peroxidasenzymer för att katalysera oxidationsreaktioner i närvaro av väteperoxid. Det mest använda peroxidaset i laboratorier och diagnostik är horseradish peroxidase (HRP); andra exempel är lactoperoxidas och myeloperoxidas.

Mekanismen innebär att enzymet cyklar mellan olika redoxstater när elektroner överförs från ett substrat till väteperoxid. Den oxiderade mellanprodukten överför sedan elektroner till ett andra substrat, ofta ett kromogent eller fluorogent ämne. I immunoassays används HRP ofta som konjugat till antikroppar eller streptavidin, vilket gör att tillsats av väteperoxid och substrat ger en observerbar signal.

Substrat och läsning: Kromogena substrat inkluderar TMB (färgen ändras från blå till gul vid stopplösning), DAB (brun färg) och ABTS. Det finns även kemiluminiscenssubstrat och fluorogena substrat för hög känslighet. Läsningen görs med spektrofotometer, luminometer eller fluorometer.

Applikationer: Peroxidbaserad detektion är central i ELISA, Western blot, immunohistokemi och vissa biosensorer. HRP-konjugatets stabilitet och breda användning gör det till en av de vanligaste metoderna för signalutveckling i många protokoll.

Begränsningar och överväganden: Känsligheten beror på substratval och reaktionstid. Väteperoxid kan inaktivera peroxidasen, och vissa prov innehåller peroxidasinhindrande ämnen. Säker hantering av väteperoxid och korrekt stopplösning är viktiga för tolkningen.