Enzymkopplad

Enzymkopplad refererar till en molekyl där ett enzym har kopplats till en annan molekyl, oftast ett protein som binder till ett mål eller en bärare i en analys. Denna koppling gör det möjligt att omvandla en obetydlig bindning till en mätbar signal genom enzymatiska reaktioner. Det kopplade enzymet katalyserar omvandlingen av ett substrat till en produkt som ger färg, luminescens eller fluorescens, vilket kan mätas instrumentellt. Antalet aktiva enzymmolekyler per mål kan ge signalförstärkning och öka känsligheten.

Vanliga tillämpningar finns inom immunanalys och diagnostik, där enzymkopplade reagenser används för att upptäcka närvaro eller mängd av ett mål. Exempel är enzymkopplade antikroppar i ELISA och immunhistokemi, där horseradish peroxidase (HRP) eller alkalisk fosfatas (AP) omvandlar substrat till färg eller ljus. Enzymkopplade märkningar används också i Western blot och i vissa molekylärbiologiska tester för att detektera nukleinsyror eller proteiner.

Tillverkning och val av koppling beror på konjugationsmetod, ofta kovalent länkning via NHS-esters eller andra biokompatibla reaktionsgrupper eller indirekt via biotin-streptavidin-system. Fördelar med enzymkopplade reagenter är ökad känslighet och möjligheter till olika läsmått (färg, luminescens, fluor). Begränsningar inkluderar enzymets stabilitet, kostnad, bakgrundssignal och behov av noggrann optimering av substrat och inkubationsvillkor.