Affinitetskromatografi

Affinitetskromatografi är en reningsmetod som utnyttjar specifika, reversibla interaktioner mellan ett målprotein och en immobiliserad ligand. Denna ligand är kovalent bunden till ett fast stödföljd, ofta ett kromatografiskt material som agaros eller silica, som sedan packas i en kolonn. Principen bygger på att endast molekyler som har en affinitet för liganden kommer att binda till stödföljet, medan andra komponenter i provet sköljs bort. När kolonnen har tvättats för att avlägsna ospecifikt bundna ämnen, elueras det bundna målet genom att ändra förhållandena för att bryta bindningen. Detta kan göras genom att ändra pH, jonstyrka, använda en konkurrerande molekyl eller denaturera proteinet. Den valda liganden är avgörande och väljs baserat på egenskaperna hos målproteinet. Exempel på ligander inkluderar antikroppar, enzymer, substratanaloger eller affinitetspeptider. Affinitetskromatografi är en mycket selektiv teknik som kan ge hög renhet i ett enda steg, vilket gör den användbar för isolering av proteiner, antikroppar och nukleinsyror från komplexa blandningar, såsom celllysat eller serum.