méretkizárásos

Méretkizárásos kromatográfia (SEC, size-exclusion chromatography) olyan kromatográfiai módszer, amely a molekulák hidrodinamikai mérete alapján választja el a mintát oldószerben. A kolonnában porózus szemcsékből álló állófázis található, amelynek pórusmérete meghatározott. A mozgó fázis áthaladása közben a nagy molekulák kizáródnak a pórusokból, ezért gyorsabban elhagyják a kolonnát; a kisebb molekulák behatolnak a pórusokba, így hosszabb tartózkodási időt töltenek és később kerülnek ki. Így az elválasztás alapja a méret, nem pedig a kémiai kölcsönhatások.

Az SEC jellemzője, hogy a mintával közvetlen kölcsönhatásba lépő karakterisztikák minimálisak, ezért a biomolekulák szerkezetét általában megőrzik a elválasztás során. Gyakran alkalmazzák fehérje- és polimeranalízisben, valamint molekulatömeg-eloszlás meghatározására. Az állófázisok közé tartoznak például a Sepharose- és Sephacryl-alapú kolonnák, a Bio-Gel sorozat, illetve polisztirol-divinilbenzol alapú gyöngyök; a választás a vizsgált anyagok és a kívánt elválasztási tartomány alapján történik. Kalibrációra standardokat használnak (ismert molekulatömegű fehérjék és polimerek), hogy a kioldási volumból becsülni lehessen a hidrodinamikai méretet vagy a molekulatömeget.

Alkalmazási területek közé tartozik a fehérje- és polimeranalízis, a molekulatömeg-eloszlás meghatározása, valamint minta előkészítése (desalting vagy puffercsere). Korláta, hogy a felbontás relatíve alacsony; a kölcsönhatások mellőzése érdekében megfelelő pórusméretű kolonnát kell kiválasztani, és a minta kölcsönhatásai a kolonna fázisával befolyásolhatják az eredményeket.