fluorimétrie

La fluorimétrie est une technique analytique qui mesure l’intensité de la lumière émise par des fluorophores après excitation lumineuse. Elle est utilisée pour l’analyse qualitative et quantitative de substances fluorescentes et peut offrir une sensibilité élevée et une bonne spécificité dans des échantillons complexes.

Principe et mode de fonctionnement: l’échantillon est excité par une lumière à une longueur d’onde donnée et réémet des photons à des longueurs d’onde typiquement plus longues. L’instrument enregistre soit le spectre d’émission pour une excitation fixe, soit le spectre d’excitation pour une émission donnée, et peut aussi mesurer la décroissance temporelle de l’émission pour obtenir la vie moyenne des états excités.

Instrumentation: un fluorimètre comprend une source lumineuse (lampes au xénon, LED, laser), un système de sélection spectrale (monochromateurs et filtres), une cuve ou cellule d’échantillon et un détecteur sensible (photomultiplicateur ou photodiode). Des configurations plus modernes permettent la fluorimétrie en temps réel, la fluorimétrie de vie (lue par des techniques telles que TCSPC) et des mesures d’anisotropie.

Modes et données: la fluorimétrie d’état stationnaire fournit des intensités et des spectres d’émission; la fluorimétrie temporelle fournit des courbes de décroissance et des durées de vie, utiles pour étudier l’environnement chimique ou les interactions moléculaires.

Applications et limites: utilisée en biologie, biochimie, immunologie, médecine diagnostique, surveillance environnementale et industrie pharmaceutique pour la détection et la quantification de fluorophores et de fluoroprotéines. Avantages: grande sensibilité, faible bruit de fond. Inconvénients: autofluorescence, quenching, effet d’auto-filtration et photodégradation possible des échantillons.