spettrofotometri

Lo spettrofotometro è uno strumento analitico che misura l’assorbimento o la trasmissione della luce da parte di una soluzione o di un campione in una determinata regione spettrale. L’informazione ottenuta, legata all’intensità della luce incidente e di quella trasmessa, consente di determinare la concentrazione di una specie cromofora presente nel campione.

Principi fondamentali: la trasmittanza T è data da I/I0, dove I0 è l’intensità iniziale e I è l’intensità trasmessa; l’assorbimento è A = log10(I0/I) = -log10(T). Secondo la legge di Beer-Lambert, A = εcl, dove ε è l’assorbività molare, c la concentrazione e l l è la lunghezza del cammino ottico, tipicamente fornita dalla geometria della cella.

Componenti principali: una sorgente luminosa, un sistema di monocromazione (prisma o reticolo) per selezionare la lunghezza d’onda, una cella contenente il campione, un rivelatore e un sistema di rilevamento che trasmette l’informazione all’utente o al software di analisi. Gli strumenti possono funzionare in modalità single-beam o double-beam, dove la seconda strada serve da riferimento per ridurre gli errori instrumental.

Tipi comuni: spettrofotometri UV-Vis (circa 190–800 nm) e spettrofotometri a infrarossi; estensioni includono misure in altre regioni spettrali e accessori per liquidi, solids o campioni biologici.

Applicazioni: quantificazione di fenomeni cromofori in chimica, biochimica, farmaceutica, analisi ambientale e controllo qualità; determinazione di concentrazioni, identità di sostanze e purezza di campioni.

Limiti: richiede campioni trasparenti o debitamente preparati, interferenze di cromofori concorrenti o turbidità, e dipendenza dalle condizioni di campionamento e dall’esatta lunghezza del cammino ottico.