flowcytometri

Flowcytometri er en laserbasert teknologi som analyserer fysiske og kjemiske egenskaper til enkeltceller eller andre partikler i væske, mens de passerer gjennom et fokusert lysfelt og blir observert av flere detektorer. Gjennom måling av spredning av lys og fluorescens kan man bestemme størrelse, indre struktur og tilknyttede molekylære markører i høy gjennomstrømming.

Prinsipp og måleparametere: Prøver blir hydrodynamisk fokusert slik at hver partikkel passerer gjennom laserstrålen separat. Forward scatter (FSC) gir estimat av cellestørrelse, side scatter (SSC) viser granulasjon og indre kompleksitet. Fluorescense mottas fra fluoroforer bundet til celler eller partikler og måles i flere kanaler for multiparametrisk analyse. Data må korrigeres for overlapp mellom kanaler (kompensering). Viktige bruksområder inkluderer immunfenotyping, celle-sorting (FACS), cellecyklus, viabilitet og apoptose analyser, samt intracellular staining.

Komponenter og utstyr: Fluidics-enhet som leverer prøven og skaper hydrodynamisk fokus; optikk med lasere, filtre og fotomultiplikatorrør; elektronikk og programvare for datainnsamling og analyse.

Anvendelser: Brukes i klinisk og forskningsmessig sammenheng for hematologi og immunologi, sortering av spesifikke cellepopulasjoner, og måling av cytokiner, proliferasjon og behandlingseffekt.

Fordeler og begrensninger: Stor multiparametrisk kapasitet og høy gjennomstrømming sammenlignet med andre metoder; krever ofte enkeltcelle-suspensjon, riktig fluoroforvalg og investering i utstyr, samt kompleks dataanalyse.

Historie: Utviklingen tok fart fra 1960- og 1970-tallet og har siden utviklet seg til moderne, flerparametriske instrumenter og FACS-teknikk.