Fosfospesifisiä

Fosfospesifisiä tarkoittaa ominaisuutta, jossa molekyyli tunnistaa tai sitoutuu pääasiassa fosforyloituneeseen muotoon kohdemolekyylistä. Fosforylaatio on yleinen muutos, jossa proteiiniin lisätään fosfaattiryhmä seriinien, treoniinien tai tyrosiiniin kohdalla, ja se usein muuttaa proteiinin toimintaa tai vuorovaikutuksia. Fosfospesifisiä reagenteja käytetään etenkin tunnistamaan tätä fosfo-tilaa soluissa ja kudoksissa.

Yleisimpiä fosfospesifisiä reagenteja ovat fosfoepitoppeja tunnistavat anti- tai sidosreagenteet. Niitä käytetään esimerkiksi Western blotissa, immunohistokemiallisessa analyysissä ja soluviljelmistä signaalireittien aktivaation seuraamisessa. Esimerkkejä ovat fosfo-ERK, fosfo-AKT ja fosfo-tyrosiini-antikehot.

Spesifisyyden varmistamisessa käytetään asianmukaisia kontrollimalleja. Fosfataasin käsittely tai peptidikilpailut voivat osoittaa, että tunnistus perustuu fosforylaatioon. Ristiinreaktivisuus ei-fosforyloituneiden muotojen kanssa voi johtaa virheellisiin tuloksiin, joten validointi ja kontrollit ovat välttämättömiä.

Näytteiden käsittelyssä on tärkeää estää fosforylaation menetys: näytteet pidetään asianmukaisessa lämpötilassa, käytetään fosfataasin estäjiä ja pyritään nopeaan käsittelyyn sekä oikeaan säilytykseen. Fosfospesifisiä reagenteja käyttämällä voidaan saada tietoa solujen signaalireaktioista ja proteiinien aktiivisuudesta kyseisen fosforylaation kontekstissa.