voolutsütomeetriat

Voolutsütomeetria (flow cytometry) on laboratoorne meetod, mille abil üksikrakke või teisi osakesi analüüsitakse, kui need läbivad vedelikvoogu ning satuvad valguseallika (tavaliselt laser) valgusele. Iga rakk tekitab valgustus- ja fluorescenceemissioone, mida hulgalt mõõdetakse; samaaegselt saab koguda mitmeid omadusi mitmevärviliste märgistuste abil. Põhjuseks on rakud läbiv vedelikvoog, mis viib need järjest üksteise järel mõõtmiseks läbi optilise süsteemi ning detektoriteni.

Põhimõte ja komponendid: vedeliku vool suunab rakud üksteise järel läbiva kanalina, kasutades hydrodynamic focusing’ut. Rakud saavad valgusallikalt erinevaid lainepikkusi, mida detektorid mõõdavad. Esmane teave tuleb forward scatterist (FSC), mis peegeldab raku suurust, ja side scatterist (SSC), mis peegeldab raku sisemist struktuuri. Fluorestentsed signaalid kogutakse erinevatelt detektoritelt, mis vastavad märgistuste lainedele; sageli kasutatakse fotomultipliatooreid (PMT-d). Andmed kogutakse arvutisse.

Töövoog hõlmab proovide märgistamist sobivate fluoroforidega (antikehade konjugatsioon), kontrollide seadistamist, compensatsiooni spektrilise ülekatmise korrigeerimiseks ning rakukvantiilide (gating) määramist andmemaatriksite loomiseks.

Rakendused ja piirangud: kasutatakse immunofenotüpiseerimiseks, rakutsükli ja apoptoosi analüüsiks, DNA sisu hindamiseks ning funktsionaalsete markerite määramiseks nii immunoloogia, hematoloogia, onkoloogia kui mikrobioloogia valdkondades. Eelistena on suur läbilaskevõime ja mitmevärviline analüüs, kuid nõutakse ühekordsed rakumassist ning kvaliteedikontrolli, kalibreerimist ja keerukat andmeanalüüsi. Piiranguteks on proovide ettevalmistusnõuded ja spectral overlap.