käänteistranskriptioPCR

Käänteistranskriptio-PCR (engl. *reverse transcription PCR*, lyh. RT-PCR) on molekyylibiologian tekniikka, joka yhdistää RNA:n ja DNA:n tutkimuksen. Menetelmä koostuu kahdesta päävaiheesta: käänteisestä transkriptiosta ja PCR-amplifikaatiosta. Ensimmäisessä vaiheessa RNA-molekyylit transkriptoidaan komplementaariseksi DNA:ksi (cDNA) käyttämällä entsyymiä reverse transkriptaasia. Tämä mahdollistaa geenien ilmentymisen tutkimisen, sillä RNA on väliaikainen kopio geenistä, joka vastaa proteiinien tuotantoa solussa.

Toisessa vaiheessa syntynyt cDNA-amplifioidaan PCR-menetelmällä. PCR (polymerase chain reaction) on tekniikka, jossa DNA-segmentti kopioidaan eksponentiaalisesti käyttämällä DNA-polymeraasia, alunperäisiä nukleotidisekvenssejä (primerejä) ja lämpötilavaihteluita. RT-PCR:llä voidaan havaita ja mitata spesifisiä RNA-sekvenssejä, kuten virusten RNA:ta tai solujen geenien ilmentymistä. Menetelmä on erityisen tärkeä infektiosairauksien diagnosoinnissa, kuten SARS-CoV-2:n (COVID-19) tutkimuksessa.

RT-PCR:n etuna on sen herkkyys ja spesifisyys, sillä se pystyy havaitsemaan hyvin pienetkin RNA-määrät. Menetelmän rajoituksena on kuitenkin mahdollinen kontaminaatio ja tarve huolellisesta laboratoriotekniikasta. Lisäksi se vaatii laadukkaita reagensseja ja asianmukaisen koulutuksen suorittamiseksi. RT-PCR on tärkeä työkalu molekyylibiologiassa, lääketieteessä ja tutkimuksessa, jossa geenien ilmentymisen dynamiikkaa tai patogeenien läsnäoloa halutaan selvittää.