Sekvenseringsmetoder

Sekvenseringsmetoder refererer til de biologiske teknikker som brukes for å bestemme den nøyaktige rekkefølgen av nukleotider i en DNA- eller RNA-molekyl. Denne rekkefølgen, eller sekvensen, inneholder den genetiske informasjonen som er avgjørende for livets funksjoner. Tidlige metoder, som Sanger-sekvensering, var basert på inkorporering av modifiserte nukleotider som avsluttet DNA-syntesen, noe som tillot bestemmelse av sekvensen bit for bit. Selv om Sanger-sekvensering fortsatt er verdifull for mindre prosjekter og validering, har den blitt i stor grad erstattet av neste generasjons sekvenseringsmetoder (NGS).

NGS-teknologier muliggjør massevis av parallell sekvensering, noe som betyr at millioner av DNA-fragmenter kan sekvenseres samtidig. Dette dramatisk øker hastigheten og reduserer kostnadene for sekvensering. Ulike NGS-plattformer bruker forskjellige kjemiske og optiske prinsipp for å lese av sekvensen. Vanlige metoder inkluderer sekvensering ved syntese, der fluorescerende merkede nukleotider legges til mens en ny DNA-tråd bygges, og sekvensering ved ligering, hvor korte DNA-sonder kobles til den ukjente sekvensen. Resultatene fra disse metodene er ofte korte "reads" som deretter samles ved hjelp av bioinformatiske verktøy for å rekonstruere den komplette sekvensen. Nyere metoder, som nanopore-sekvensering, tillater også lengre reads og sekvensering i sanntid, noe som åpner for nye applikasjoner innen genetisk forskning og diagnostikk.