Ni2affinitetskolonner

Ni2affinitetskolonner, eller nickel(II) affinitykolonner, är en typ av immobiliserad metalljon-affiniteschromatografi (IMAC) som används för att rena proteiner med histidintags eller andra histidinrika sekvenser. Kolonnerna består av en solid bärare där Ni2+–joner immobiliseras via ett chelatbildande ligandsystem, vanligtvis NTA (nitrilotriacetat) eller IDA (iminodiacetisk syra). Proteiner som bär en eller flera histidinresiduer kan binda till Ni2+-jonerna genom imidazolringen i histidin.

Rening av rekombinanta His-tagade proteiner är en vanlig tillämpning. Efter att provet applicerats på kolonnen binds tagade proteiner medan många andra proteiner lossnar i tvätten. Elutionen sker normalt med ökande koncentration av imidazol i bufferten eller genom ett lätt sänkt pH, vilket konkurrerar bort histidinbindningen till Ni2+. Några procedurdetaljer inkluderar användning av låga till måttliga imidazolkoncentrationer under tvätt och högre imidazolkoncentrationer (t.ex. 100–500 mM) för elution. BuffertpH ligger ofta i närheten av neutral eller lätt basisk.

Fördelar med Ni2affinitetskolonner är enkelhet, snabbhet och generellt god renhet för His-tagade proteiner samt bred tillämpning i olika organismer. Begränsningar inkluderar att vissa endogena proteiner med histidin- eller metallbindande sidor kan bindas oavsiktligt, nickelutläckage som kan kontaminera proteinet, och behovet av att avlägsna imidazol efter elution. Man kan välja andra metalljoner, till exempel Co2+ eller Cu2+, vilket påverkar både specificitet och bindningsstyrka. Kolonnerna används ofta tillsammans med andra reningssteg för ökad renhet och funktionell bevarande.