spectrophotomètres

Un spectrophotomètre est un instrument analytique qui mesure l’intensité de la lumière à différentes longueurs d’onde pour déterminer la concentration d’un échantillon ou pour caractériser une substance. En mesurant l’absorbance ou la transmittance, il exploite la loi de Beer-Lambert, A = εlc, où A est l’absorbance, ε le coefficient d’absorption molaire, l la longueur du trajet lumineux et c la concentration.

Les composants principaux incluent une source de lumière, un sélecteur de longueur d’onde (monochromateur à prisme ou réseau), un compartiment d’échantillon et un détecteur, avec un système d’affichage ou d’enregistrement des données. Les dispositifs peuvent être à faisceau unique ou à faisceau double, ce dernier corrige les fluctuations de la source et du trajet optique. Le détecteur peut être une photodiode ou un photomultiplicateur; les sources courantes sont des lampes tungstène pour le domaine visible et des lampes au deutérium pour l’UV. L’échantillon est généralement mesuré dans des cuvettes standard ou dans des formats microplaques.

Types et applications: les spectrophotomètres UV-Vis mesurent l’absorbance dans le domaine ultraviolet et visible et servent à quantifier des protéines, acides nucléiques et colorants, ainsi que d’autres composés chimiques; des versions dédiées IR mesurent les vibrations moléculaires pour l’analyse qualitative et quantitative. Les appareils modernes peuvent être miniaturisés ou intégrés à des lecteurs de microplaques pour des analyses rapides en laboratoire.

En pratique, l’étalonnage par des standards et le contrôle de qualité sont essentiels. On évalue la précision, la linéarité et la stabilité, ainsi que les éventuelles interférences de lumière parasite et l’exactitude de la longueur d’onde. Les limites incluent les exigences d’échantillons clairs, les interférences de couleur ou de turbidité, et le choix du chemin optique.