proteimmätningar

Proteimmätningar (proteiinimittaukset) tarkoittavat proteiinien pitoisuuksien tai määrien määrittämistä näytteissä laboratoriotyössä. Tavoitteena on saada luotettavaa, toistettavaa ja kvantitatiivista tietoa proteiinipitoisuudesta, jotta näytteiden vertailu ja seuraavat analyysit voidaan suorittaa tarkasti. Mittauksia käytetään esimerkiksi biokemiallisessa tutkimuksessa, tuotantoprosessien laadunvalvonnassa sekä kliinisessä laboratorio-työssä.

Yleisimmät mittausmenetelmät ovat väri- tai dye-binding -menetelmät, spektrofotometriset ja kemialliset menetelmät. Bradford-menetelmä on nopea ja laajalti käytetty värimetodi, jossa Coomassie-Blue -väri muuttuu proteiinin kanssa ja mittaus suoritetaan näytteen absorbanssista yleensä noin 595 nm. BCA-menetelmä (bicinchoninic acid) perustuu kuparin pelkistymiseen ja BCA:n muodostumaan värilliseen kompleksin, mikä mitataan noin 562 nm. Lowry-menetelmä on herkkä ja perinteinen vaihtoehto, mutta sitä käytetään harvemmin nykyaikaisissa kartoissa yksityiskohtaisemman protokollan vuoksi. Kaikissa näissä menetelmissä tulokset ilmoitetaan standardisoitujen kurvien avulla, usein BSA-standardein.

UV-absorbanssi 280 nm -menetelmä mittaa proteiinien pitoisuutta suoraan näytteen proteiinin orgaanisten aromaattisten aminohappojen suhteellisen määrän perusteella. Tämä menetelmä on nopea ja ei-vaadi reagensseja, mutta se on herkkä kontaminaatioille ja proteiinin koostumukselle sekä vaatii suhteellisen puhtaita näytteitä.

Muita huomioita ja rajoitteita: erilaiset kontaminaatiot, kuten lipidi- tai detergentsaattien jäämät sekä rikkilähetteet voivat vääristää tuloksia. DTT:n tai asetylaatioiden kaltaisetReducing-aineet sekä niukkaliuottimet voivat heikentää joidenkin menetelmien herkkyyttä. Siksi blankot, standardikurvi ja näytteen puhdistus sekä mittaussekvenssit on sovitettava koemenetelmän mukaan.

Sovellukset ulottuvat proteiinien konsentraation määrityksestä proteiinipitoisten näytteiden laadunvalvontaan, proteiini- ja biokemiallisten kokeiden valmisteluun sekä teollisissa prosesseissa prosessinohjaukseen.