proteiinimääritysmenetelmistä

Proteiinimääritysmenetelmät ovat joukko biologisia ja kemiallisia tekniikoita, joita käytetään proteiinien pitoisuuden mittaamiseen näytteissä. Nämä menetelmät ovat välttämättömiä monilla biologian, biokemian ja lääketieteen aloilla, kuten proteiinien eristyksessä, puhdistuksessa ja toiminnan tutkimisessa.

Yksi yleisimmistä menetelmistä on Bradford-määritys, joka perustuu Coomassie Brilliant Blue G-250 -värin sitoutumiseen proteiineihin. Värin absorbanssi muuttuu proteiinien läsnäollessa, ja tätä muutosta mitataan spektrofotometrillä. Bradford-määritys on nopea ja suhteellisen helppo suorittaa, mutta sen tarkkuus voi vaihdella riippuen proteiinin tyypistä ja muista näytteen komponenteista.

Toinen yleinen menetelmä on Lowry-määritys. Tämä menetelmä perustuu proteiinien sisältämien tyrosiini- ja tryptofaanijäämien reaktioon kupari-ionien kanssa happamissa olosuhteissa, jota seuraa lisäys Folin-Ciocalteu-reagenssiin. Lowry-määritys on herkempi kuin Bradford-määritys, mutta se on myös monivaiheisempi ja herkempi häiriötekijöille.

BCA-määritys (bicinchoninic acid assay) on toinen suosittu menetelmä, joka yhdistää Lowry-menetelmän periaatteita. Siinä proteiinien sisältämät peptidiyhdisteet ja tietyt aminohappojäämät pelkistävät kupari(II)-ionit kupari(I)-ioneiksi, jotka sitten reagoivat BCA:n kanssa muodostaen värillisen kompleksin. BCA-määritys on herkkä, suhteellisen nopea ja vähemmän herkkä useille yleisille aineille kuin Bradford- tai Lowry-määritys.

UV-absorbanssiin perustuva määritys on menetelmä, jossa hyödynnetään proteiinien luontaista kykyä absorboida ultraviolettivaloa aallonpituudella 280 nm, pääasiassa tyrosiini- ja tryptofaanijäämien vuoksi. Tämä menetelmä on nopea ja ei vaadi lisäreagensseja, mutta se on vähemmän spesifinen ja sen tarkkuus voi heikentyä, jos näytteessä on muita yhdisteitä, jotka myös absorboivat UV-valoa tällä aallonpituudella. Proteiinimääritysmenetelmän valinta riippuu näytteen luonteesta, tarvittavasta herkkyydestä ja käytettävissä olevista resursseista.