nestekromatografiassa

Nestekromatografia on analyysitekniikka, jossa näyte erotellaan kolonnin läpi liikkuvan faasin (mobile phase) ja pysyvän faasin (stationary phase) välisessä vuorovaikutuksessa. Erotus perustuu yhdisteiden polaarisuuteen, kiinnittymiseen pysyvään faasiin sekä liuottimen ominaisuuksiin. Nestekromatografia on yleisesti käytetty erottelutekniikka laboratorioissa.

Laitteisto koostuu nesteenpumpusta, injektioputkesta tai injektiojärjestelmästä, kolonnista, detektorista ja tietojenkäsittelyjärjestelmästä. Näyte injektoidaan, kulkee kolonnin läpi ja sen komponentit erotetaan ajan kuluessa. Detektori tuottaa signaalin jokaiselle erotteelle yhdisteelle, jolloin voidaan sekä tunnistaa että kvantifioida yhdisteet.

Päätyypit ja olosuhteet: reversed-phase LC (RP-LC) on yleisimpiä; pysyvä faasi on epäpolaaria, tavallisimpia kolonneja ovat C18-tyypit. Normal-phase LC (NP-LC) käyttää polaaria pysyvää faasia. Eluution voi toteuttaa isokraattisena tai gradienttina; gradientti muuttaa liuottimen koostumusta ajan myötä, parantaen erottuvuutta laajemmalle yhdistejoukolle.

Pysyvien faasien ja mobilifaasien valintaan vaikuttavat yhdisteiden ominaisuudet sekä sovellus. Yleisimmät liikuttajat ovat vesipohjaiset liuottimet yhdessä orgaanisten modifikaattorien, kuten acetonitrile tai metanoli, kanssa. pH-säätö ja järjestelmän puhtaus vaikuttavat erottuvuuteen.

Detektorit: yleisiä ovat UV-Vis-, fluoresenssi-, refraktiivisuus- ja massaspektrometriaan (LC-MS) perustuvat detektorit. LC-MS mahdollistaa sekä kvantitatiivisen analyysin että rakenteellisen tunnistuksen.

Sovellukset kattavat lääkeaineiden laadunvalvonnan, ympäristöanalyysin, biolääketieteen näytteet sekä elintarvikkeiden laadunvalvonnan. Nestekromatografia tarjoaa tarkkuuden, herkkyyden ja nopeuden etuja, mutta laitteistokustannukset sekä kolonnin ylläpito voivat olla haasteita.