käänteistranskriptioPCRssä

Käänteistranskriptio PCR:ssä, eli käänteiskopiointireaktio polymeraasiketjureaktioyhteydessä, on molekyylibiologinen tekniikka, jota käytetään RNA:n havaitsemiseen ja kvantifiointiin. Normaali PCR-tekniikka toimii DNA:n kanssa, mutta käänteistranskriptio mahdollistaa sen, että DNA:ta voidaan analysoida RNA-molekyyleistä. Tämä on erityisen hyödyllistä tutkittaessa geenien ilmentymistä, sillä RNA:n määrä kudoksessa tai solussa heijastaa kyseisen geenin aktiivisuutta.

Prosessi alkaa siitä, että RNA-näyte eristetään. Tämän jälkeen käytetään entsyymiä nimeltä käänteiskopioijaentsyymi. Tämä entsyymi käyttää RNA-molekyyliä mallineena ja syntetisoi sen perusteella komplementaarisen DNA-juosteen, jota kutsutaan cDNA:ksi. Tämä cDNA-molekyyli on sitten valmis käytettäväksi tavallisessa PCR-reaktiossa.

Kun cDNA on syntetisoitu, se syötetään PCR-laitteeseen yhdessä primereiden, DNA-polymeraasin ja nukleotidien kanssa. PCR-sykli toistuu useita kertoja, jolloin haluttu cDNA-alue monistuu eksponentiaalisesti. Monistuneen cDNA:n määrä voidaan sitten mitata esimerkiksi fluoresenssimenetelmillä, mikä kertoo alkuperäisen RNA-molekyylin määrästä näytteessä. Käänteistranskriptio-PCR:ää kutsutaan usein lyhyesti RT-PCR:ksi. Se on keskeinen menetelmä monilla biologian ja lääketieteen aloilla, kuten virusten diagnostiikassa ja syöpätutkimuksessa.