immunoprecipitaatio

Immunopipitaatio on laboratoriotekniikka, jolla eristetään tietty proteiini tai proteiinikompleksi solulysytetystä näytteestä käyttäen siihen spesifistä vasta-ainetta. Vasta-aine voidaan kiinnittää kiinteään faasiin, kuten proteiini A- tai Protein G -affiniteettihiukkasiin tai magneettisiin helmisiin, jolloin muodostunut immunokompleksi voidaan pestä pois muista proteiineista.

Periaate on yksinkertainen: kohdeproteiini sitoutuu vasta-aineeseen, ja kompleksi kiinnitetään kiinteään faasiin. Pesujen jälkeen epäspesifinen sitoutuminen poistuu, ja lopullinen eristetty proteiini tai proteiinikompleksi voidaan eluoida analysoitavaksi. Yleisiä analyysimenetelmiä ovat SDS-PAGE:n ja Western blotin avulla suoritettava todentaminen sekä massaspektrometria.

Variantit ja sovellukset: klassinen immunopipitaatio eristää yksittäisen proteiinin. Ko-immunopipitaatio (co-IP) mahdollistaa proteiinien vuorovaikutusten tutkimisen, kun mukana olevat kumppanit voidaan tunnistaa ja identifioida. Käänteinen IP (reverse IP) käyttää toisen proteiinin sitoutumistapaa kohteesta kumppanin eristämiseen. Immunopurifikointi yleisesti viittaa puhdistukseen, jossa kiinnitetty vasta-aine ohjaa kohdeproteiinien eristämistä lisäanalyyseja varten.

Käyttö ja rajoitteet: IP vaatii tarkasti valittua ja spesifistä vasta-ainetta sekä olosuhteita, jotka säilyttävät proteiinikompleksin vuorovaikutukset. Epäspesifiset sidokset, epitoopisen peittymisen sekä liuottimen vaikutus voivat heikentää tuloksia. Kontrollit, kuten epäspesifinen IgG-kontrolli ja bead-kontrolli, ovat tärkeitä tulosten tulkinnassa.

Tulkinta: eristetty proteiini osoitetaan usein Western blotilla tai massaspektrometrialla, ja vuorovaikutukset vahvistetaan toistuvin tutkimuksin sekä negatiivisilla kontrollikokeilla.