Käänteisfaasikromatografiaa

Käänteisfaasikromatografia (RP-HPLC) on yleinen nestekromatografian tyyppi, jota käytetään yhdisteiden erottamiseen niiden polaarisuden perusteella. Siinä käytetään hydrofobista (ei-polaarista) kiinteää faasia ja polaarisempaa liikkuvaa faasia, joka koostuu tyypillisesti vedestä ja orgaanisesta liuottimesta, kuten metanolista tai asetonitriilistä. Kromatografian perusperiaate käänteisfaasissa on se, että polaarisemmat yhdisteet vuorovaikuttavat vähemmän kiinteän faasin kanssa ja kulkevat kolonnin läpi nopeammin, kun taas vähemmän polaariset (hydrofobisemmat) yhdisteet sitoutuvat voimakkaammin kiinteään faasiin ja poistuvat hitaammin.

Erottelu tapahtuu, kun näyte injektoidaan kolonnin läpi kulkevaan liikkuvaan faasiin. Kun näyte kulkee kiinteän faasin läpi, eri yhdisteet retentoituvat eri tavoin riippuen niiden hydrofobisuudesta. Mitä hydrofobisempi yhdiste on, sitä enemmän se vuorovaikuttaa hydrofobisen kiinteän faasin kanssa ja sitä kauemmin se kestää kolonnista poistumista. Liikkuvan faasin koostumusta voidaan säätää erottelun optimoimiseksi. Tyypillisesti liikkuvan faasin vesipitoisuutta vähennetään ja orgaanisen liuottimen osuutta lisätään, mikä lisää eluoivan voiman vaikutusta ja edistää hydrofobisten yhdisteiden poistumista.

Käänteisfaasikromatografiaa käytetään laajalti monilla aloilla, mukaan lukien lääketutkimuksessa, ympäristöanalyysissä, elintarviketurvallisuudessa ja biotekniikassa. Sitä käytetään muun muassa lääkeaineiden, proteiinien, peptidien, nukleotidien ja luonnontuotteiden erottamiseen ja analysointiin. Menetelmän monipuolisuus ja tehokkuus tekevät siitä yhden suosituimmista kromatografisista tekniikoista.