T7promootori

T7-promootori on bakteerifagin T7:n RNA-polymeraasin erityisesti tunnistama DNA-promootori, jota käytetään laajalti rekombinanttisessa proteiinien ilmaisussa bakteereissa. Sen tunnettu perussekvenssi on 5'-TAATACGACTCACTATA-3', ja transkriptio alkaa yleensä seuraavan guaniinin kohdalta (+1). Promootori on hyvin tarkasti tunnistettu T7 RNAP:n toimesta, mikä mahdollistaa kohdegeenin voimakkaan ja nopeasti käynnistyvän ilmaisun.

Promootorin toiminta edellyttää isäntäsolua, joka tuottaa T7 RNA-polymeraasin. Yleisin järjestelmä on E. coli BL21(DE3) tai sen johdannaiset, joissa T7 RNAP tuotetaan lacUV5-lähettävän promootorin alaisuudessa ja IPTG-induktio käynnistää transkription kohdegeenin T7-promootorin kautta. T7-promootorijärjestelmät ovat tavallisesti yhdistettyjä pET-tyyppisiin vektoreihin, joissa kohdegeeni sijaitsee promootorin alapuolella.

Käyttöön liittyy sekä vahvuuksia että rajoituksia. T7-promootori on erittäin vahva ja tuottaa suuria määriä RNA:ta ja proteiinia, mutta vaatii tietynlaisia isäntäkäytäntöjä ja voi aiheuttaa solukuormitusta tai toksisuutta proteiinien kohdentamisessa. Leakkieexpressio ja kontrollin säätöön liittyvät modifikaatiot, kuten T7 lac tai T7 lacUV5 -promootiorakenteet, ovat yleisiä parannusvaihtoehtoja.

Sovelluksin mukaan T7-promootoria käytetään laajasti proteiinien tuotannossa, entsyymien tutkimuksessa ja proteiinien purkamisessa. Se on vakiintunut osa monia vektorikirjastoja ja ilmaisujärjestelmiä sekä kokeellisissa että teollisissa yhteyksissä.