Immunofluorescenza

Immunofluorescenza è una tecnica immunocitochimica che utilizza anticorpi coniugati a fluorocromi per visualizzare la distribuzione di antigeni specifici in cellule o tessuti mediante microscopia a fluorescenza. Il principio si basa sull’interazione antigene-anticorpo; l’emissione luminosa del fluorocromo eccitato permette di localizzare e, in alcuni casi, quantificare la sostanza d’interesse.

Si distinguono due approcci principali: immunofluorescenza diretta, in cui l’anticorpo primario è direttamente marcato, e indiretta, dove un anticorpo secondario marcato riconosce l’anticorpo primario, aumentando sensibilità e flessibilità. Fluorocromi comuni includono FITC, rhodamina e famiglie più recenti come gli Alexa Fluor. L’allestimento richiede fissazione e, se necessario, permeabilizzazione dei campioni per consentire l’accesso degli anticorpi.

La tecnica trova impiego in diagnostica clinica (es. malattie autoimmuni, identificazione di agenti infettivi) e nella ricerca (localizzazione di proteine, studi di colocalizzazione, analisi di segnali cellulari). L’uso di microscopi a epifluorescenza o confocale consente immagini ad alta risoluzione e analisi multiparametrica.

Limitazioni includono fotobleaching, autofluorescenza tissutale, possibile cross-reattività degli anticorpi e difficoltà di quantificazione assoluta. Controlli negativi e positivi, oltre a appropriata calibrazione e scelta dei fluorocromi, sono essenziali per risultati affidabili.