Home

densiteitsgradientcentrifugatie

Densiteitsgradientcentrifugatie is een laboratoriumtechniek om moleculen en cellulaire deeltjes te scheiden op basis van hun dichtheid door middel van een dichtheidsgradiënt in een centrifugevat. Er bestaan twee hoofdprincipes. Bij isopycnische scheiding (buoyantie) bewegen deeltjes naar de positie in de gradiënt waar de lokale dichtheid gelijk is aan de dichtheid van het deeltje; het eindpunt hangt af van de buoyante dichtheid en de massa van het deeltje. Bij rate-zonale scheiding scheiden deeltjes voornamelijk op basis van grootte en massa in een vooraf gevormde dichtheidsgradiënt; scheiding is tijd- en snelheidafhankelijk.

Gradiënten worden gevormd met oplosmiddelen die verschillende dichtheden hebben, continu of als stappen. Veelgebruikte media zijn

Toepassingen omvatten de scheiding van subcellulaire organellen zoals mitochondriën en chloroplasten, virussen, lipoproteïnen, ribosomale subeenheden en

sucrosegradienten,
CsCl-gradienten,
Percoll
en
Nycodenz/iodixanol.
De
centrifugatie
gebeurt
in
ultracentrifuges
bij
hoge
relatieve
centrifugekrachten;
de
deeltjes
worden
doorgaans
in
de
gradiënt
naar
verschillende
posities
getrokken.
Na
centrifugatie
worden
de
delen
of
fracties
uit
de
gradiënt
opgehaald
en
geanalyseerd.
eiwitcomplexen.
Ook
wordt
DNA
met
specifieke
dichtheden
gescheiden,
bijvoorbeeld
plasmide-DNA
met
CsCl-gradienten.
De
techniek
biedt
hoge
scheidingresolutie
en
milde
behandeling,
maar
vereist
gespecialiseerde
apparatuur,
gradientvoorbereiding
en
tijd.
Nadelen
zijn
onder
meer
complexiteit,
kosten
en
mogelijk
verlies
of
aantasting
van
gevoelige
moleculen.